组织培养应用实例

例1，杜鹃花的快速繁殖

杜鹃花是较常见的园艺花卉，品种多栽培容易，通过侧芽增殖的技术，能在一年内生产几十万株小苗投放市场。具体的方法如下：

外植体的准备：取健壮的嫩枝，去叶后切取顶部1.0～1.5厘米的切段，先用肥皂水洗净，再在1%～2%的安替福民溶液中灭菌10～15分钟，用无菌水冲洗3次，将灭菌后的茎段接种在1/2的Andereson无机盐+2毫克/升异戊基腺苷+0.5毫克/升吲哚乙酸，3%蔗糖的液体培养基中培养。几周后侧芽生长到1～2厘米。

Anderson培养基配方(单位：毫克/升)：

NHNO400，KNO480，MgSO7HO370，MnSOHO16.9，ZnSO7HO8.

42CaCl2HO440，KIO.83，COCl0.83，HBO6.2，NaHPOHO380，

242FeSO7H55.7，Na-EDTA74.5，维生素B0.4，肌醇100。

第一阶段的继代培养：将上述1～2厘米的侧芽切下后接种含有1.5毫克/升异戊基腺苷+4毫克/升吲哚乙酸的1/2Anderson培养基中，当新的嫩枝产生时，形成大量的不定芽。这些芽切割后在相同培养基中连续继代培养几次。

第二阶段的继代培养：这一阶段将得到的芽或嫩枝接种在1～15毫克/升的异戊基腺苷+0.5～4毫克/升吲哚乙酸的Anderson固体培养基中(加0.8%琼脂)，激素浓度按品种而异。每二个月每个培养的芽就可生长成20～40个嫩枝。

生根和移栽：有两种方法可使用，一是将嫩枝直接扦插于自然条件下的人工基质中(砂、蛭石、锯末等)，保持湿度，促使生根。另一种方法是转移到1/3Anderson培养基中，除去异戊基腺昔和碘化钾，加0.5毫克/升吲哚丁酸和600毫克/升的活性碳，一个月后就可产生根系。培养基的pH值为4.5。幼苗移栽后要保持高湿度，防止高温和阳光直射，土壤或人工基质的通气性良好，以利于幼根的生长，提高幼苗移栽的成活率。

例2.葡萄脱病毒苗的生产

从葡萄园中采取刚萌芽的茎尖(1～2厘米)，用1.2%次氯酸钠+0.1%吐温20表面消毒灭菌10分钟，用无菌水冲洗3次，在超净工作台上，双筒解剖镜下进行仔细剥离。用自制的解剖针(最细的绣花针固定在玻棒上即可)效果较好，剥去幼叶，露出圆滑的生长点，用自制的解剖刀(取双面刀片的一部分固定在玻棒上)仔细切取所需的茎尖，随即接种于培养基中。茎尖为0.5～1毫米，带1～2个叶原基;培养基为MS配方，加入大量元素、微量元素、甘氨酸和维生素，加入3%蔗糖，0.8%琼脂，pH调为5.8，0.1mg/L的萘乙酸和1.0mg/L的6苄基腺嘌呤。

热处理是将上述接种的茎尖，立即放置于27℃，光照15小时加35℃，黑暗9小时的条件下培养，经7天热处理后，转移至25℃下，光照15小时的条件下培养。经过21天的培养，茎尖生长，出现小叶片，成为2厘米左右的小茎段。

在培养至18、21、25、31天时分别取样，在6kV加速电压的PSEM500型扫描电子显微镜下观察制备的新叶片细胞中是否含有病毒。在确认已脱病毒后，应用快速繁殖侧芽生长的技术，大量繁殖脱病毒葡萄苗。

葡萄的快速繁殖侧芽使用的培养基配方为MS+1.0mg/L6-苄基腺嘌呤+1.0%mg/L吲哚乙酸。当侧芽长到一定数量后，将切段转移到诱导生根的培养基中，即1/2MS+0.1mg/L6-苄基腺嘌呤+1.0mg/L的萘乙酸。

形成根系的葡萄试管苗，经20天左右生长，具有5～8张叶片的小植株。此时可将培养温度降至20℃，光照强度增加到500勒克斯以上，同时打开盖子，进行5～7天的炼苗。

炼苗后进行移苗，小心洗去根系琼脂，将小苗移到以锯末为支持基质的苗床上，用1/10的MS液体培养基浇苗，并覆盖塑料薄膜进行保湿，昼夜温度15～25℃，避免阳光直射。当小苗长出2～3张幼叶时，可用稀人粪尿+10%尿素施肥，25～40天后可投放市场。为防止移苗过程中被病毒媒介再侵染，应在苗床四周布置昆虫网，防止昆虫的叮咬。

茎尖培养加热处理进行葡萄脱病毒苗生产，其脱病毒率可高达90%以上。